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CD25 (IL2RA) 是激活的人类自然杀伤细胞中 PRDM1 的直接转录靶点
Blood ( IF 21.0 ) Pub Date : 2018-11-29 , DOI: 10.1182/blood-2018-99-113460
Burcu Akman 1, 2 , Deniz Kursun 1, 2 , Tevfik Hatipoglu 1, 2 , Xiaozhou Hu 1, 2 , Wing C Chan 3 , Can Kucuk 2, 4
Blood ( IF 21.0 ) Pub Date : 2018-11-29 , DOI: 10.1182/blood-2018-99-113460
Burcu Akman 1, 2 , Deniz Kursun 1, 2 , Tevfik Hatipoglu 1, 2 , Xiaozhou Hu 1, 2 , Wing C Chan 3 , Can Kucuk 2, 4
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摘要 背景:PRDM1 是一种调节 B 和 T 淋巴细胞分化和/或稳态的转录因子。它还可能在自然杀伤 (NK) 细胞稳态中发挥作用,并且在 NK 细胞衍生的淋巴瘤中经常失活。PRDM1的许多靶基因已被报道;然而,对 NK 细胞中 PRDM1 直接靶向的基因的了解甚少。IL2 受体信号传导对 NK 细胞活化的许多特征(包括持续增殖和存活)至关重要。在这里,我们评估了参与 NK 细胞活化的关键基因 CD25 (IL2Rα) 在活化的人 NK 细胞中是否被 PRDM1 转录抑制。方法:将 ChIP-Seq 应用于使用涉及基因工程 NK 细胞靶细胞(即 K562-Cl9-mb21) 来确定 PRDM1 占据的基因组位置。CD25 中的 PRDM1 结合位点筛选是使用两个不同的 ChIP-Seq 峰值调用程序计算执行的。用共表达 PRDM1α 和 GFP 的逆转录病毒构建体转导两种恶性 NK 细胞系(NK92 和 KHYG1)。转导后 48 小时,用 DNA 微阵列、RNA-Seq 和 RT-qPCR 在 GFP 分选的 NK 细胞上评估 CD25 转录表达。CD25 表达在 NK92 和 KHYG1 细胞系中被两种不同的 shRNA 稳定地敲低。CD25 在通过与 K562-Cl9-mb21 共培养激活的原代人 NK 细胞中异位表达。分别对 CD25 shRNA 转导的 NK 细胞系或在限制 IL2 浓度下具有异位 CD25 表达的原代 NK 细胞进行 GFP 竞争测定。结果:用 CisGenome 和 MACS 软件在活化的原代 NK 细胞中检测到 PRDM1 占据 CD25 的第一个内含子。通过 ChIP-qPCR 在正常活化的 NK 细胞中进一步验证 PRDM1 与 CD25 的直接结合。两个 PRDM1α 转导的 PRDM1 非表达 NK 细胞系通过 DNA 微阵列和 RNA-Seq 显示出对 CD25 的显着转录抑制,其抑制与 RT-qPCR 交叉验证。CD25 的稳定敲低抑制了在限制 IL2 浓度下培养的两种 NK 细胞系的生长。相比之下,CD25 的异位表达导致体外培养的原代 NK 细胞的阳性选择。结论:总而言之,这些结果确立了 CD25 作为人 NK 细胞中 PRDM1 的直接转录靶标。这些观察结果为 PRDM1 在终止 NK 细胞活化和生长中的作用提供了额外的支持,当它被解除管制时对肿瘤转化或 NK 细胞功能有影响。披露 没有需要声明的相关利益冲突。
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更新日期:2018-11-29

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