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通过溶液相肽合成制备 caspase-3/7 底物 Ac-DEVD-pNA。
Nature Protocols ( IF 13.1 ) Pub Date : 2010-Feb-01 , DOI: 10.1038/nprot.2009.223 Quinn P Peterson 1 , David R Goode , Diana C West , Rachel C Botham , Paul J Hergenrother
Nature Protocols ( IF 13.1 ) Pub Date : 2010-Feb-01 , DOI: 10.1038/nprot.2009.223 Quinn P Peterson 1 , David R Goode , Diana C West , Rachel C Botham , Paul J Hergenrother
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该协议描述了比色 caspase-3/7 底物 Ac-DEVD-pNA 的克级溶液相合成。半胱天冬酶是细胞炎症和细胞凋亡级联反应的组成部分，通常由细胞生物学家、药物化学家和化学生物学家研究。特别是，半胱天冬酶酶活性的评估是评估细胞死亡途径和新的细胞凋亡调节剂的标准方法。Caspase 酶活性可以用肽显色或荧光底物方便地监测，某些肽序列赋予某些 Caspase 选择性。这些肽底物的合成通常通过固相合成进行，这种方法对于生产高通量筛选所需的克数并不理想。本文描述了一种使用溶液相肽合成合成 Ac-DEVD-pNA caspase-3/7 底物的简便方法。该协议涉及迭代 PyBOP 介导的耦合和 Fmoc 脱保护，速度快（约 5 天），操作简单，可用于生成超过 1 克的产品，而成本仅为商业底物的一小部分。
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更新日期：2017-01-31
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