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基于生物发光共振能量转移测定的MBD融合荧光素酶全球DNA甲基化检测系统
Analytical Chemistry ( IF 6.7 ) Pub Date : 2016-08-26 00:00:00 , DOI: 10.1021/acs.analchem.6b02565 Wataru Yoshida 1 , Yuji Baba 1 , Isao Karube 1
Analytical Chemistry ( IF 6.7 ) Pub Date : 2016-08-26 00:00:00 , DOI: 10.1021/acs.analchem.6b02565 Wataru Yoshida 1 , Yuji Baba 1 , Isao Karube 1
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DNA甲基化在基因表达的调节中起着重要作用。在正常细胞中，构成人类基因组约45％的转座因子被高度甲基化以沉默其表达。在癌细胞中，转座因子被低甲基化。因此，全球DNA甲基化水平被认为是癌症诊断的生物标志物。在这项研究中，使用甲基-CpG结合域（MBD）融合的荧光素酶开发了一种基于生物发光共振能量转移（BRET）的整体DNA甲基化水平测量方法。在该测定中，MBD荧光素酶识别甲基化的CpG，因此，检测到荧光素酶和荧光DNA嵌入染料之间的BRET。我们证明了BRET信号取决于目标DNA的DNA甲基化水平。而且，通过亚硫酸氢盐法测定，BRET信号与人类基因组DNA上的LINE1 DNA甲基化水平相关。这些结果表明，可以简单地通过测量BRET信号来检测人类基因组DNA的总体DNA甲基化水平。
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更新日期：2016-08-26
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