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用于测试蛋白酶及其抑制剂的酶谱和反向酶谱。
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) Pub Date : 2022-01-01 , DOI: 10.1007/978-1-0716-1896-7_12
Preety Choudhary 1 , Vineet Kumar Mishra 1 , Snehasikta Swarnakar 1
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酶谱法是一种强大的技术,用于分析作用于任何生物大分子的不同水解酶。特别是,酶谱法用于测定丝氨酸蛋白酶的活性,例如基质金属蛋白酶 (MMP),而反向酶谱法用于检测多种实验样品中的金属蛋白酶组织抑制剂 (TIMP)。酶谱法是一种在非还原条件下在含有聚丙烯酰胺凝胶的底物中电泳分离蛋白酶的方法。通过将阴离子去污剂与非离子去污剂交换来使分离的蛋白质复性,并将凝胶在用于特定蛋白酶的特定缓冲液中孵育。用考马斯蓝染色溶液对凝胶进行染色后,蛋白水解活性在深色背景下显示为清晰的无色条带。相比之下,反向酶谱法是一种检测蛋白酶抑制剂的平行技术。除了底物明胶之外,蛋白酶(即MMP)也以适当的比例掺入聚丙烯酰胺凝胶中。电泳后,在显影步骤中,MMP 会特异性地消化不存在 TIMP 的区域的底物。因此,抑制剂/TIMP 表示为染色后对透明背景的暗抑制区。在本章中,讨论了样品制备、运行酶谱和数据解释过程中的常见故障排除。指定注释以提高方法的灵敏度。总之,酶谱学对于纳克水平的酶测定和改进诸如子宫内膜异位症、类风湿性关节炎、骨关节炎、肿瘤侵袭、



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更新日期:2022-01-01
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