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通过 CRISPR-Cas9 诱导的同源重组简化基因敲除
ACS Synthetic Biology ( IF 3.7 ) Pub Date : 2021-12-09 , DOI: 10.1021/acssynbio.1c00194 Neil C Dalvie 1, 2 , Timothy Lorgeree 1, 2 , Andrew M Biedermann 1, 2 , Kerry R Love 1, 2 , J Christopher Love 1, 2
ACS Synthetic Biology ( IF 3.7 ) Pub Date : 2021-12-09 , DOI: 10.1021/acssynbio.1c00194 Neil C Dalvie 1, 2 , Timothy Lorgeree 1, 2 , Andrew M Biedermann 1, 2 , Kerry R Love 1, 2 , J Christopher Love 1, 2
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工业细胞系的基因工程通常需要敲除多个内源基因。像 CRISPR-Cas9 这样的工具已经在广泛的工业生物中实现了串行或并行的基因破坏,但缺乏用于筛选和验证基因组编辑的通用做法。对于基因破坏,同源重组的 DNA 修复比非同源末端连接具有几个优势,包括更有效地筛选敲除克隆和提高基因组稳定性。在这里,我们设计并表征了旨在通过同源重组修复 Cas9 诱导的基因破坏的敲除片段。我们鉴定了Komagataella phaffii的敲除克隆通过 PCR 具有高保真度,无需 Sanger 测序。用于同源重组 (30 bp) 的短重叠序列能够通过 PCR 生成基因特异性敲除片段,从而无需亚克隆。最后,我们证明了敲除片段赋予的基因型在普通培养条件下是稳定的。
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更新日期:2022-01-21
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