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使用FUCCI技术分离活的早衰细胞。
Scientific Reports ( IF 3.8 ) Pub Date : 2016-08-09 , DOI: 10.1038/srep30705
Danli Wang , Ping Lu , Yang Liu , Li Chen , Rui Zhang , Weihao Sui , Alexandru George Dumitru , Xiaowen Chen , Feiqiu Wen , Hong-Wei Ouyang , Junfeng Ji

细胞衰老在诸如肿瘤发生和机体衰老等多种生物学过程中起着重要作用。但是,缺乏专门鉴定和分离活衰老细胞的方法,妨碍了对调节细胞衰老的分子机制的精确理解。在这里,我们报道利用基于荧光泛素化的细胞周期指示剂(FUCCI)技术可以分离由阿霉素处理诱导的活的早衰活细胞。将人包皮成纤维细胞(HFF)暴露于低剂量的阿霉素会导致细胞衰老表型,包括形成指示DNA损伤的γ-H2AX和53BP1灶,减少细胞增殖和增加与衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal ) 活动。重要的,阿霉素诱导的衰老细胞停滞在细胞周期的S / G2 / M期,这可以通过编码与单体Azami-Green(mAG-hGeminin)融合的hGeminin片段的构建体来报告。流式细胞仪从携带mAG-hGeminin报告基因的阿霉素处理过的HFF中对GFP(+)细胞进行分选,能够分离和富集培养物中的活衰老细胞。我们的研究开发了一种新的方法来鉴定和分离活的早衰细胞,从而提供了研究细胞衰老的新工具。



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更新日期:2016-08-11
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