Protein & Peptide Letters ( IF 1.0 ) Pub Date : 2021-08-31 , DOI: 10.2174/0929866528666210301150421 Xin Fan 1 , Yuan Yuan 1 , Fan Zhang 1 , Lei Ai 1 , Zhonghao Wu 1 , Ren Peng 1
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背景：热休克蛋白（HSPs）代表了一组重要的蛋白质，由各种生物特别是在压力条件下产生。DnaK 是原核生物中的 Hsp70 同源物，当微生物面临压力条件时，它具有不可或缺的作用。然而，很少有关于来自红球菌属的 DnaK 的数据。可在文献中找到。在之前的一项研究中，我们报道了甲苯和苯酚压力分别使来自红红树莓 SD3 的 DnaK 的表达增加了 29.87 倍和 3.93 倍。因此，我们推断 DnaK 与 R. ruber SD3 的有机溶剂耐受性相关。
目的：为了阐明DnaK在R. ruber SD3有机溶剂耐受性中的作用，本文对R. ruber SD3中Dnak的表达、纯化和功能进行了分析。
方法：在这篇文章中，来自红色红血球 SD3 的 DnaK 在大肠杆菌 BL21(DE3) 中异源表达，并通过亲和层析纯化。使用动力学测定、对接、分子伴侣活性测定和微生物生长来进行 DnaK 的功能分析。
结果：重组DnaK经亲和层析快速纯化，纯化倍数为1.9，回收率为57.9%。R. ruber SD3 的 Dnak 的 Km、Vmax 和 Kcat 分别为 80.8 μM、58.1 nmol/min 和 374.3 S -1。重组蛋白在体外形成三聚体，计算分子量为214 kDa。根据计算机分析，DnaK 与其他分子伴侣和代谢中的一些重要蛋白质相互作用。在重组 DnaK 存在下过氧化氢酶的比活性是在 BSA 或 Tris-HCl 缓冲液中暴露于 54°C 1 小时后的 1.85 倍或 2.00 倍。分别在 43°C 和苯酚存在下，带有 pET28-dnak 的大肠杆菌转化体的生长速度高于带有 pET28 的大肠杆菌转化体。
结论：R. ruber SD3中DnaK的生化特性和相互作用分析加深了我们对DnaK功能的理解。当R. ruber受到加热和有机溶剂等各种压力时，DnaK在微生物生长中发挥了重要作用。
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