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双歧杆菌接合巨质粒 pMP7017 复制功能的分子分析
Microbial Biotechnology ( IF 4.8 ) Pub Date : 2021-05-03 , DOI: 10.1111/1751-7915.13810
Rebecca L Dineen 1, 2 , Christophe Penno 3 , Philip Kelleher 1, 2 , Maxence J B Bourin 1, 2 , Mary O'Connell-Motherway 1 , Douwe van Sinderen 1, 2
Affiliation
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pMP7017 是从肠道共生短双歧杆菌JCM7017 中分离出来的接合巨质粒，并显示编码两种假定的复制酶，此处指定为 RepA 和 RepB。在目前的工作中，RepB 被确定为 pMP7017 复制起始子，即repB基因，并且其周围区域被证明足以允许两个双歧杆菌物种（短双歧杆菌和长双歧杆菌亚种）的自主复制。长。 RepB 显示与其编码序列下游的重复序列结合，并且该区域被确定对于有效复制至关重要。根据我们的结果，我们假设 pMP7017 是严格自动调节控制下的iteron调节质粒（IRP）。重组产生和纯化的 RepB 被确定在溶液中以二聚体形式存在，这与其他 IRP 的复制品不同，后者以二聚体和单体的混合物形式存在。此外，还创建了稳定的低拷贝双歧杆菌-大肠杆菌穿梭载体 pRD1.3，该载体可用于大基因的克隆和表达，编码 5.1 kb apuB基因的克隆和异源表达证明了这一点。将来自短双歧杆菌UCC2003 的细胞外淀粉支链淀粉酶转化为长双歧杆菌亚种。长NCIMB8809。
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