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使用N-糖基转移酶的膜蛋白的体外糖基化
ACS Omega ( IF 3.7 ) Pub Date : 2021-04-26 , DOI: 10.1021/acsomega.1c00835
Leshani Ahangama Liyanage 1 , Michael S. Harris 1 , Gabriel A. Cook 1
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糖蛋白是翻译后修饰的蛋白,几乎参与每个生物过程,占蛋白质组的很大一部分。N-联糖基化可以通过N进行-糖基转移酶(NGT),可识别蛋白质内的共有氨基酸序列-Asn-X-Ser / Thr-(NXT)。该酶催化包含核苷磷酸酶的寡糖供体与天冬酰胺残基的酰胺氮之间的糖苷键形成。糖部分的附着可以通过影响蛋白质的折叠,调节与其他生物分子的相互作用以及在细胞水平上修饰其功能来影响蛋白质的生理和生物学特性。我们对膜糖蛋白的特性特别感兴趣,膜糖蛋白是许多不同疾病状态的关键组成部分。因此,体外蛋白质糖基化的使用可以帮助进一步评估这些重要大分子的性质的影响。膜模拟环境中以逐步的方式进行了N-连接糖基化的体外研究,以确认糖基化可溶性蛋白的方法可适用于膜蛋白。由于疏水性肽和膜蛋白不溶于水性溶剂,因此使用了洗涤剂和脂质系统。逐步方法由可溶性7-残基肽,疏水性WALP-NVT肽和γ-糖聚糖膜蛋白的糖基化组成,它们均包含糖基化位点Asn-Val-Thr(NVT)。使用大肠杆菌表达胸膜肺炎放线杆菌表达的NGT进行样品的糖基化基因组和由核苷酸连接的供体提供的葡萄糖的单个糖部分被添加到糖基化位点。凝胶电泳,质谱和NMR研究用于检测糖基转移酶活性并显示单个葡萄糖分子的附着。我们的实验表明,含有N-糖基化共有序列的小或大膜蛋白可以在膜模拟环境中被NGT糖基化。



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更新日期:2021-05-11
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