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利用环状聚合酶延伸反应建立 SARS-CoV-2 反向遗传学系统
Cell Reports ( IF 7.5 ) Pub Date : 2021-04-01 , DOI: 10.1016/j.celrep.2021.109014
Shiho Torii 1 , Chikako Ono 1 , Rigel Suzuki 2 , Yuhei Morioka 3 , Itsuki Anzai 3 , Yuzy Fauzyah 3 , Yusuke Maeda 3 , Wataru Kamitani 4 , Takasuke Fukuhara 2 , Yoshiharu Matsuura 1
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严重急性呼吸综合征冠状病毒 2 (SARS-CoV-2) 已被确定为 2019 年冠状病毒病 (COVID-19) 的病原体。尽管在 SARS-CoV-2 中观察到多个突变,但由于缺乏方便的诱变方法,对 SARS-CoV-2 的每个突变的功能分析受到限制。在这项研究中,我们建立了一种基于 PCR 的无细菌方法来生成 SARS-CoV-2 感染性克隆。通过环状聚合酶延伸反应 (CPER) 组装 10 个 SARS-CoV-2 cDNA 片段并将所得环状基因组转染到易感细胞中后,重组 SARS-CoV-2 可以以高滴度和高精度抢救。报告病毒和突变病毒的感染性克隆的构建可以通过两个简单的步骤完成:通过 PCR 将报告基因或突变引入所需的 DNA 片段(约 5,000 个碱基对),并通过 CPER 组装 DNA 片段。这种反向遗传学系统可能会促进对 SARS-CoV-2 的进一步了解。





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更新日期:2021-04-20
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