小蛋白泛素对蛋白的翻译后修饰涉及许多细胞事件。用胰蛋白酶消化泛素化的蛋白质后，具有与赖氨酸的ε氨基缀合的双甘氨酸残基的肽（“K-ε-双甘氨酸”或简称为“ diGly”）可用于追溯原始修饰位点。diGly肽的高效免疫纯化与质谱法的灵敏检测相结合，导致迄今鉴定出的泛素化位点数量大大增加。我们对该工作流程进行了一些改进，包括在富集程序之前对肽进行离线高pH反相分级分离，以及在离子路由多极中包含更高级的肽片段化设置。还，为了保留抗体珠，使用基于过滤器的塞子更有效地清洁样品会导致对diGly肽具有更高的特异性。这些改进导致在蛋白酶体抑制作用下，常规检测人宫颈癌细胞（HeLa）细胞裂解物中23,000多种diGly肽。我们展示了这种策略对几种不同细胞类型和体内样品（例如脑组织）的遍在蛋白组谱进行深入分析的功效。这项研究为蛋白质泛素化分析提供了原始的工具箱，以揭示深层细胞泛素化基因组。人宫颈癌细胞（HeLa）细胞中的000 diGly肽在细胞中被蛋白酶体抑制后会裂解。我们展示了这种策略对几种不同细胞类型和体内样品（例如脑组织）的遍在蛋白组谱进行深入分析的功效。这项研究为蛋白质泛素化分析提供了原始的工具箱，以揭示深层细胞泛素化基因组。人宫颈癌细胞（HeLa）细胞中的000 diGly肽在细胞中被蛋白酶体抑制后会裂解。我们展示了这种策略对几种不同细胞类型和体内样品（例如脑组织）的遍在蛋白组谱进行深入分析的功效。这项研究为蛋白质泛素化分析提供了原始的工具箱，以揭示深层细胞泛素化基因组。



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