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使用CD71 / TER119流式细胞术鉴定和分析小鼠类红细胞祖细胞
Journal of Visualized Experiments Pub Date : 2011-08-05 , DOI: 10.3791/2809 Miroslav Koulnis , Ramona Pop , Ermelinda Porpiglia , Jeffrey R. Shearstone , Daniel Hidalgo , Merav Socolovsky
Journal of Visualized Experiments Pub Date : 2011-08-05 , DOI: 10.3791/2809 Miroslav Koulnis , Ramona Pop , Ermelinda Porpiglia , Jeffrey R. Shearstone , Daniel Hidalgo , Merav Socolovsky
促红细胞生成的研究旨在了解早期造血和红系祖细胞是如何形成红细胞的。具体而言,红细胞形成的速度受促红细胞生成素(Epo)激素调节,促红细胞生成素的合成由组织缺氧触发。适当的组织氧合作用的威胁导致Epo迅速增加,从而导致促红细胞生成速率的增加,这一过程称为促红细胞生成应激反应。循环红细胞数量的增加导致组织氧气输送的改善。因此,有效的促红细胞生成应激反应对于生理和病理状况(例如高原,贫血,出血,化学疗法或干细胞移植)的生存和恢复至关重要。小鼠是研究红细胞生成及其应激反应的关键模型。小鼠的定型(成人型)红细胞生成发生在胚胎肝脏12.5至15.5天之间,新生儿脾脏以及成年脾脏和骨髓中的胎儿肝脏中。识别组织中红系祖细胞的经典方法依赖于这些细胞在铺板于含Epo的半固体培养基中时产生红细胞集落的能力。根据形态学标准鉴定其类红细胞前体后代。这些经典方法均不允许访问大量分化阶段特异的类红细胞进行分子研究。在这里,我们提出了一种直接在新鲜分离的小鼠组织中鉴定和研究分化阶段特异性类红细胞祖细胞和前体的流式细胞仪方法。该测定依赖于细胞表面标记CD71,Ter119,以及流式细胞术的“前向散射”参数,它是细胞大小的函数。CD71 / Ter119测定法可用于研究类红细胞祖细胞在体内对红细胞生成应激的反应,例如在贫血小鼠或低氧条件下的小鼠中。它也可用于直接在转基因成年小鼠或胚胎的组织中研究类红细胞祖细胞,以评估修饰的分子途径在红细胞生成中的特定作用。
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更新日期:2011-08-05
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