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基于生长的高通量选择平台能够重塑 4-羟基苯甲酸羟化酶活性位点
ACS Catalysis ( IF 11.3 ) Pub Date : 2020-06-05 , DOI: 10.1021/acscatal.0c01892 Sarah Maxel 1 , Derek Aspacio 1 , Edward King 2 , Linyue Zhang 1 , Ana Paula Acosta 1 , Han Li 1
ACS Catalysis ( IF 11.3 ) Pub Date : 2020-06-05 , DOI: 10.1021/acscatal.0c01892 Sarah Maxel 1 , Derek Aspacio 1 , Edward King 2 , Linyue Zhang 1 , Ana Paula Acosta 1 , Han Li 1
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我们报告了一个基于大肠杆菌中 NADP(H) 氧化还原平衡恢复的有氧、基于生长的选择平台，并展示了其在加氧酶高通量进化中的应用。一轮选择后进行简单的生长测定，使铜绿假单胞菌4-羟基苯甲酸羟化酶 (PobA) 能够有效羟基化 4-羟基苯甲酸 (4-HBA) 和 3,4-二羟基苯甲酸 (3,4-DHBA)，两种没食子酸生物合成的连续步骤。结构建模表明活性位点氢键网络的精确重组，如果没有组合序列空间的深度导航，这是很难获得的。我们设想该选择平台在工程 NADPH 依赖性氧化还原酶中的普遍应用。
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更新日期：2020-06-19
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