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双标志标签对甲状腺素运载蛋白影响的结构分析。
Biochemistry ( IF 2.9 ) Pub Date : 2020-03-02 , DOI: 10.1021/acs.biochem.0c00105 Mehdi Shirzadeh 1 , Michael L Poltash 1 , Arthur Laganowsky 1 , David H Russell 1
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重组蛋白增加了我们对蛋白质生理作用的认识；然而，亲和纯化标签在分析前通常不会被切割，并且它们对蛋白质结构、稳定性和组装的影响常常被忽视。在本研究中，使用天然离子淌度质谱 (IM-MS) 研究了 N 末端双 FLAG (FT2) 标签融合到甲状腺素运载蛋白 (TTR)（之前研究中使用的一种构建体）的稳定作用。碰撞诱导解折叠和可变温度电喷雾电离的组合用于比较 FT2-TTR 与野生型和 C 端标记 TTR 的气相和溶液相稳定性。尽管气相和溶液相 FT2-TTR 的稳定性均有所提高，但在高温下观察到 FT2-TTR 的热降解，即 Lys9 和 Cys10 之间发生主链裂解。这种裂解反应与之前报道的 TTR 金属蛋白酶活性一致 [Liz 等人，2017]。 2009]并且被金属螯合或过量的锌抑制。这项研究突出了 TTR 亲和标签稳定性的影响，并强调了原生 IM-MS 提供的前所未有的细节，以评估重组蛋白与其野生型对应物的结构差异。
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