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Chaperone mediated detection of small molecule target binding in cells.
Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2020-01-23 , DOI: 10.1038/s41467-019-14033-0 Kelvin F Cho 1 , Taylur P Ma 2 , Christopher M Rose 2 , Donald S Kirkpatrick 2 , Kebing Yu 2 , Robert A Blake 1
Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2020-01-23 , DOI: 10.1038/s41467-019-14033-0 Kelvin F Cho 1 , Taylur P Ma 2 , Christopher M Rose 2 , Donald S Kirkpatrick 2 , Kebing Yu 2 , Robert A Blake 1
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The ability to quantitatively measure a small molecule's interactions with its protein target(s) is crucial for both mechanistic studies of signaling pathways and in drug discovery. However, current methods to achieve this have specific requirements that can limit their application or interpretation. Here we describe a complementary target-engagement method, HIPStA (Heat Shock Protein Inhibition Protein Stability Assay), a high-throughput method to assess small molecule binding to endogenous, unmodified target protein(s) in cells. The methodology relies on the change in protein turnover when chaperones, such as HSP90, are inhibited and the stabilization effect that drug-target binding has on this change. We use HIPStA to measure drug binding to three different classes of drug targets (receptor tyrosine kinases, nuclear hormone receptors, and cytoplasmic protein kinases), via quantitative fluorescence imaging. We further demonstrate its utility by pairing the method with quantitative mass spectrometry to identify previously unknown targets of a receptor tyrosine kinase inhibitor.
中文翻译：
分子伴侣介导的细胞中小分子靶标结合的检测。
定量测量小分子与其蛋白质靶标相互作用的能力对于信号通路的机制研究和药物发现都至关重要。然而，目前实现这一目标的方法具有特定的要求，可能会限制其应用或解释。在这里，我们描述了一种互补的目标参与方法，HIPStA（热休克蛋白抑制蛋白稳定性分析），这是一种高通量方法，用于评估小分子与细胞中内源性、未修饰的目标蛋白的结合。该方法依赖于伴侣蛋白（如 HSP90）被抑制时蛋白质周转的变化以及药物靶标结合对这种变化的稳定作用。我们使用 HIPStA 来测量药物与三类不同药物靶点（受体酪氨酸激酶、核激素受体、和细胞质蛋白激酶），通过定量荧光成像。我们通过将该方法与定量质谱配对来识别受体酪氨酸激酶抑制剂以前未知的靶标，进一步证明了其效用。
更新日期：2020-01-23
中文翻译：
分子伴侣介导的细胞中小分子靶标结合的检测。
定量测量小分子与其蛋白质靶标相互作用的能力对于信号通路的机制研究和药物发现都至关重要。然而，目前实现这一目标的方法具有特定的要求，可能会限制其应用或解释。在这里，我们描述了一种互补的目标参与方法，HIPStA（热休克蛋白抑制蛋白稳定性分析），这是一种高通量方法，用于评估小分子与细胞中内源性、未修饰的目标蛋白的结合。该方法依赖于伴侣蛋白（如 HSP90）被抑制时蛋白质周转的变化以及药物靶标结合对这种变化的稳定作用。我们使用 HIPStA 来测量药物与三类不同药物靶点（受体酪氨酸激酶、核激素受体、和细胞质蛋白激酶），通过定量荧光成像。我们通过将该方法与定量质谱配对来识别受体酪氨酸激酶抑制剂以前未知的靶标，进一步证明了其效用。
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