人类衰老过程中，晚期糖基化终末产物 (AGE) 在蛋白质中积累。特别是，AGE 结构N ^ω -(羧甲基)精氨酸 (CMA) 是通过糖化胶原中的氧化产生的，是生物样品中检测到的主要蛋白质之一。在本研究中，我们研究了胶原蛋白中生成 CMA 的机制，并在富含胶原蛋白的组织中检测到了 CMA。当各种蛋白质样品与葡萄糖一起孵育时，使用单克隆抗体检测到的 CMA 含量仅在糖化胶原蛋白中以时间依赖性方式增加，而N ^ε -(羧甲基)赖氨酸 (CML)（一种主要抗原性 AGE）的形成，在所有糖化蛋白中均检测到。还通过电喷雾电离-液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS) 观察到糖化胶原蛋白中主要的 CMA 形成。在葡萄糖与胶原蛋白的孵育过程中，CMA 的形成随着葡萄糖浓度的增加而增强，而在二羰基捕获剂和金属螯合剂的存在下则受到抑制。在将胶原蛋白与乙二醛一起孵育时也观察到了 CMA 的形成，并且当乙二醛与 I-IV 型胶原蛋白一起孵育时，CMA 以时间依赖性方式生成。为了识别 CMA 形成的热点，将糖化胶原蛋白的胰蛋白酶消化物应用于与抗 CMA 缀合的亲和柱。通过 LC-MS/MS 和氨基酸序列分析检测到了对整合素识别很重要的几种 CMA 肽。通过将合成的肽与乙二醛和核糖一起温育来确认每个序列上的 CMA 形成。LC-MS 检测到小鼠皮肤中的 CMA 水平高于其他 AGE。此外，老年人主动脉中的 CMA 积累量更大。总体而言，我们的研究提供了证据表明CMA是具有代表性的AGE结构，可作为反映胶原蛋白氧化和糖化的有用指标。



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