烟酰胺单核苷酸腺苷酸转移酶 (NMNAT; EC 2.7.7.1) 催化 NMN+ 和 ATP 可逆地产生 NAD+，是癌症和神经退行性疾病的潜在药物靶点。尚未报道适用于高通量筛选 (HTS) 和机械跟踪的敏感生物发光测定形式，并且对于鉴定 NMNAT 的新调节剂具有价值。为此，我们报告了在 384 孔板格式中使用 Photinus pyralis ATP 依赖性荧光素酶和荧光素检测 NMNAT1 的生物发光测定的发展。我们还报告了使用这种格式来确定时间依赖性和与底物竞争的机械后续范式。该测定和后续范例用于筛选来自美国国家癌症研究所 (NCI) 机械多样性集 II 和批准的肿瘤学集 VI 的针对 NMNAT1 的 912 种化合物。鉴定了 20 种在 20 µM 时抑制大于 35% 的抑制剂。后续研究表明，七种活性物质是 NMNAT1 的时间依赖性抑制剂。2,3-Dibromo-1,4-naphthoquinone 是最有效的时间依赖性抑制剂，抑制酶正向和反向反应的 IC50 值分别为 0.76 和 0.26 µM，并显示为 NMN 和 ATP竞争的。生物发光 NMNAT 测定和机械跟踪将用于鉴定 NAD 生物合成的新调节剂。后续研究表明，七种活性物质是 NMNAT1 的时间依赖性抑制剂。2,3-Dibromo-1,4-naphthoquinone 是最有效的时间依赖性抑制剂，抑制酶正向和反向反应的 IC50 值分别为 0.76 和 0.26 µM，并显示为 NMN 和 ATP竞争的。生物发光 NMNAT 测定和机械跟踪将用于鉴定 NAD 生物合成的新调节剂。后续研究表明，七种活性物质是 NMNAT1 的时间依赖性抑制剂。2,3-Dibromo-1,4-naphthoquinone 是最有效的时间依赖性抑制剂，抑制酶正向和反向反应的 IC50 值分别为 0.76 和 0.26 µM，并显示为 NMN 和 ATP竞争的。生物发光 NMNAT 测定和机械跟踪将用于鉴定 NAD 生物合成的新调节剂。



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