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将绑定到MnmH蛋白的RNA转移富含Geranylated tRNA-硒化的可能中间产物？
PLOS ONE ( IF 2.9 ) Pub Date : 2016-04-14 , DOI: 10.1371/journal.pone.0153488
Gunilla Jäger 1 , Peng Chen 2 , Glenn R Björk 1
PLOS ONE ( IF 2.9 ) Pub Date : 2016-04-14 , DOI: 10.1371/journal.pone.0153488
Gunilla Jäger 1 , Peng Chen 2 , Glenn R Björk 1
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摆动的核苷5-甲基氨基甲基-2-硫代尿苷（mnm5s2U）存在于对Lys和Glu特异的细菌tRNA中，而5-羧甲基氨基甲基-2-硫代尿苷（cmnm5s2U）存在于对Gln特异的tRNA中。（c）mnm5s2U的硫可以通过硒（Se）交换-硒的反应-由mnmH（ybbB，selU，sufY）基因编码的硒磷酸依赖性tRNA 2-硒代尿苷合酶催化。MnmH蛋白具有包含一个催化Cys（C97）的罗丹结构域和包含Walker A基序的P环结构域，后者是潜在的核苷酸结合位点。我们之前已经分离出了沙门氏菌的一种突变体，鼠伤寒鼠伤寒沙门氏菌，其中MnmH蛋白（G67E）的Rhodanese结构域发生改变，从而介导了修饰的核苷的形成，该核苷具有一个连接在mRNA5s2U的s2组和tRNA上的cmnm5s2U的ger2（ge）基团（C10H17片段）。为了进一步表征增加geranylation活性的结构要求，我们在这里报告了39个独立分离的突变体的分析，该突变体催化mnm5ges2U的形成。所有这些突变体在罗丹色域中均具有氨基酸取代，表明该域对于增加Geranylation活性至关重要。尽管在体内仅检测到少量的（c）mnm5s2U香叶基衍生物，但MnmH +的野生型也具有体外的香叶基转移酶活性。体内的硒化活性对罗丹色域中的催化Cys97具有绝对的要求，而香叶酰化活性则没有。显然，MnmH具有两个不同的酶活性，其中罗丹酶结构域至关重要。P-环结构域中完整的Walker基序对于香叶基化活性是必需的，这暗示它是香叶基焦磷酸酯（GePP）的结合位点，而后者是香叶基转移反应中的体外供体分子。从野生型和MnmH（G67E）突变体纯化的MnmH具有结合的tRNA，该tRNA富含Geranylated tRNA。结合较早发表的数据，表明这种结合的geranylated tRNA可能是tRNA硒化的中间产物。MnmH具有两个不同的酶活性，其中罗丹色域至关重要。P-环结构域中完整的Walker基序对于香叶基化活性是必需的，这暗示它是香叶基焦磷酸酯（GePP）的结合位点，而后者是香叶基转移反应中的体外供体分子。从野生型和MnmH（G67E）突变体纯化的MnmH具有结合的tRNA，该tRNA富含Geranylated tRNA。结合较早发表的数据，表明这种结合的geranylated tRNA可能是tRNA硒化的中间产物。MnmH具有两个不同的酶活性，其中罗丹色域至关重要。P-环结构域中完整的Walker基序对于香叶基化活性是必需的，这暗示它是香叶基焦磷酸酯（GePP）的结合位点，而后者是香叶基转移反应中的体外供体分子。从野生型和MnmH（G67E）突变体纯化的MnmH具有结合的tRNA，该tRNA富含Geranylated tRNA。结合较早发表的数据，表明这种结合的geranylated tRNA可能是tRNA硒化的中间产物。从野生型和MnmH（G67E）突变体纯化的MnmH具有结合的tRNA，该tRNA富含Geranylated tRNA。结合较早发表的数据，表明这种结合的geranylated tRNA可能是tRNA硒化的中间产物。从野生型和MnmH（G67E）突变体纯化的MnmH具有结合的tRNA，该tRNA富含Geranylated tRNA。结合较早发表的数据，表明这种结合的geranylated tRNA可能是tRNA硒化的中间产物。
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更新日期：2019-11-01
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