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超级文件夹绿色荧光蛋白在高温体内的表达和使用：研究极端嗜热生物学的工具。
Environmental Microbiology ( IF 4.3 ) Pub Date : 2008-01-15 , DOI: 10.1111/j.1462-2920.2007.01482.x
Felipe Cava 1 , Miguel Angel de Pedro , Emilio Blas-Galindo , Geoffrey S Waldo , Lars F Westblade , José Berenguer
Environmental Microbiology ( IF 4.3 ) Pub Date : 2008-01-15 , DOI: 10.1111/j.1462-2920.2007.01482.x
Felipe Cava 1 , Miguel Angel de Pedro , Emilio Blas-Galindo , Geoffrey S Waldo , Lars F Westblade , José Berenguer
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超级文件夹GFP（sGFP）是绿色荧光蛋白的一种变体，当与折叠不良的蛋白融合时可以有效折叠。在这项研究中，我们显示sGFP，而不是增强的GFP，在极端嗜热菌Thermus thermophilus（Tth）中在70摄氏度时在体内具有功能。因此，允许使用sGFP作为体内定位标签。我们创建了一套质粒，可在大肠杆菌和Tth中表达羧基末端sGFP融合蛋白。为了证明sGFP作为Tth体内定位标签的便利性，我们标记了GroES（细菌GroES / GroEL分子伴侣的小亚基），NarC（硝酸盐呼吸装置的膜成分）和PhoA（TAT-分泌的周质蛋白），并使用共聚焦显微镜观察sGFP融合蛋白的分布。与NarC和PhoA的融合产生了酶活性蛋白，分别补充了narC和phoA菌株。通过共聚焦显微镜观察GroES-sGFP蛋白的分布，发现细胞中具有均匀的荧光，这与GroES的细胞质特性完全一致，而NarC-sGFP蛋白则位于膜上。最后，共聚焦显微镜和生物化学的结合表明，PhoA位于周质中。我们建议sGFP将广泛应用于表征各种极端嗜热系统。这与GroES的胞质特性完全吻合，而NarC-sGFP蛋白位于膜上。最后，共聚焦显微镜和生物化学的结合表明，PhoA位于周质中。我们建议sGFP将广泛应用于表征各种极端嗜热系统。这与GroES的胞质特性完全吻合，而NarC-sGFP蛋白位于膜上。最后，共聚焦显微镜和生物化学的结合表明，PhoA位于周质中。我们建议sGFP将广泛应用于表征各种极端嗜热系统。
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更新日期：2019-11-01
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