A micro-technique of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using ABTS, 2,2'-azino-di-(3-ethylbenzthiazoline sulfonic acid), as a substrate for horseradish peroxidase (HRP) conjugate was studied. In a comparative study among 4 substrates, namely; 5-aminosalicylic acid (5AS), O-phenylenediamine (OPD), O-tolidine (OT) and ABTS, for HRP in terms of sensitivity, it was found that ABTS was the most sensitive, stable and the best in visuality by its bluish-green color. The precise reproducibility of ELISA readings was attained by making correction of observed absorbance with positive reference serum. Sera from 50 patients positive for S. japonicum (Sj) egg and from 50 healthy residents in non-infested areas were diluted at 1:200 and examined by this procedure of ELISA against crude egg antigen. The upper limit of 99% critical range of the absorbance among negative sera was 0.080. The reactions of egg positive cases were beyond this value, being 0.505 at the minimal absorbance (1.259 +/- 0.278), and were easily distinguished from negatives even by naked eyes. Cross-reactivity to Sj egg antigen was studied using sera from 75 cases with 22 kinds of varied parasitic infections. Among them, S. mansoni and S. haematobium infections showed higher absorbance while the others did a little higher than the normal range. The highest absorbance shown by a Trichobilharzia brevis case was 0.177. The results indicated that micro-ELISA technique with ABTS developed in the present study is applicable to the field survey because of its high sensitivity, specificity and reproducibility.

中文翻译：

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以ABTS，2-2'-叠氮基-二-（3-乙基苯并噻唑啉磺酸）为过氧化物酶底物的ELISA评价及其在血吸虫病诊断中的应用。

研究了使用ABTS，2,2'-叠氮基-二-（3-乙基苯并噻唑啉磺酸）作为辣根过氧化物酶（HRP）共轭物的底物的酶联免疫吸附测定（ELISA）的微技术。在4种基质之间的比较研究中，即 5-氨基水杨酸（5AS），邻苯二胺（OPD），邻甲苯胺（OT）和ABTS对HRP的敏感性方面，发现ABTS具有蓝色，是最灵敏，稳定和可视性最好的-绿色。通过用阳性参考血清校正观察到的吸光度，可获得ELISA读数的精确再现性。将来自日本血吸虫（Sj）鸡蛋阳性的50位患者和未受感染地区的50位健康居民的血清以1：200稀释，并通过此ELISA方法针对粗蛋抗原进行检查。阴性血清中吸光度的99％临界范围的上限为0.080。鸡蛋阳性病例的反应超出了该值，在最小吸光度（1.259 +/- 0.278）下为0.505，即使用肉眼也很容易与阴性反应区分开。使用来自22种不同寄生虫感染的75例患者的血清研究了与Sj卵抗原的交叉反应性。其中，曼氏链球菌和沙门氏菌感染表现出较高的吸光度，而其他感染则略高于正常范围。短毛癣菌病例显示的最高吸光度为0.177。结果表明，本研究开发的具有ABTS的微型ELISA技术具有很高的灵敏度，特异性和可重复性，因此可用于野外调查。鸡蛋阳性病例的反应超出了该值，在最小吸光度（1.259 +/- 0.278）下为0.505，即使用肉眼也很容易与阴性反应区分开。使用来自22种不同寄生虫感染的75例患者的血清研究了与Sj卵抗原的交叉反应性。其中，曼氏链球菌和沙门氏菌感染表现出较高的吸光度，而其他感染则略高于正常范围。短毛癣菌病例显示的最高吸光度为0.177。结果表明，本研究开发的具有ABTS的微型ELISA技术具有很高的灵敏度，特异性和可重复性，因此可用于野外调查。鸡蛋阳性病例的反应超出了该值，在最小吸光度（1.259 +/- 0.278）下为0.505，即使用肉眼也很容易与阴性反应区分开。使用来自22种不同寄生虫感染的75例患者的血清研究了与Sj卵抗原的交叉反应性。其中，曼氏链球菌和沙门氏菌感染表现出较高的吸光度，而其他感染则略高于正常范围。短毛癣菌病例显示的最高吸光度为0.177。结果表明，本研究开发的具有ABTS的微型ELISA技术具有很高的灵敏度，特异性和可重复性，因此可用于野外调查。使用来自22种不同寄生虫感染的75例患者的血清研究了与Sj卵抗原的交叉反应性。其中，曼氏链球菌和沙门氏菌感染表现出较高的吸光度，而其他感染则略高于正常范围。短毛癣菌病例显示的最高吸光度为0.177。结果表明，本研究开发的具有ABTS的微型ELISA技术具有很高的灵敏度，特异性和可重复性，因此可用于野外调查。使用来自22种不同寄生虫感染的75例患者的血清研究了与Sj卵抗原的交叉反应性。其中，曼氏链球菌和沙门氏菌感染表现出较高的吸光度，而其他感染则略高于正常范围。短毛Trichobilharzia案例显示的最高吸光度为0.177。结果表明，本研究开发的具有ABTS的微型ELISA技术具有很高的灵敏度，特异性和可重复性，因此可用于野外调查。