编码 OmpA 蛋白信号肽的 DNA 片段是大肠杆菌的主要外膜蛋白，已被插入到高水平表达载体 pIN-III 中。外源 DNA 片段可以在 ompA 信号肽编码序列之后立即克隆到独特的 EcoRI、HindIII 或 BamHI 位点的三个阅读框中的任何一个中。克隆的外源基因在 lpp 启动子和 lac 启动子操纵子的控制下。该基因的表达受相同载体产生的 lac 阻遏物的调节。使用 pIN-III-ompA 载体，将仅编码 β-内酰胺酶成熟部分的 DNA 片段插入 EcoRI 位点。在诱导基因表达后，β-内酰胺酶被分泌到周质空间中。由于载体中的接头序列，ompA 信号肽被正确去除，导致产生在其氨基末端具有四个额外氨基酸残基 (Gly-Ile-Pro-Gly) 的 β-内酰胺酶。3 小时诱导后，β-内酰胺酶积累到总细胞蛋白的 20%，而没有任何可检测到的前-β-内酰胺酶积累。使用寡核苷酸定向的位点特异性诱变，我们还去除了接头序列，并在诱导基因表达后，产生了具有真实 NH2 末端序列的 β-内酰胺酶，其数量甚至比具有接头序列的 β-内酰胺酶还要多。β-内酰胺酶积累到总细胞蛋白的 20%，而没有任何可检测到的前-β-内酰胺酶积累。使用寡核苷酸定向的位点特异性诱变，我们还去除了接头序列，并在诱导基因表达后，产生了具有真实 NH2 末端序列的 β-内酰胺酶，其数量甚至比具有接头序列的 β-内酰胺酶还要多。β-内酰胺酶积累到总细胞蛋白的 20%，而没有任何可检测到的前-β-内酰胺酶积累。使用寡核苷酸定向的位点特异性诱变，我们还去除了接头序列，并在诱导基因表达后，产生了具有真实 NH2 末端序列的 β-内酰胺酶，其数量甚至比具有接头序列的 β-内酰胺酶还要多。



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