Calenduloside E (CE), a natural triterpenoid compound isolated from Aralia elata, can protect against ox-LDL-induced human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) injury in our previous reports. However, the exact targets and mechanisms of CE remain elusive. For the sake of resolving this question, we designed and synthesized a clickable activity-based probe (CE-P), which could be utilized to fish the functional targets in HUVECs using a gel-based strategy. Based on the previous studies of the structure-activity relationship (SAR), we introduced an alkyne moiety at the C-28 carboxylic group of CE, which kept the protective and anti-apoptosis activity. Via proteomic approach, one of the potential proteins bound to CE-P was identified as Hsp90AB1, and further verification was performed by pure recombinant Hsp90AB1 and competitive assay. These results demonstrated that CE could bind to Hsp90AB1. We also found that CE could reverse the Hsp90AB1 decrease after ox-LDL treatment. To make our results more convincing, we performed SPR analysis and the affinity kinetic assay showed that CE/CE-P could bind to Hsp90AB1 in a dose-dependent manner. Taken together, our research showed CE could probably bind to Hsp90AB1 to protect the cell injury, which might provide the basis for the further exploration of its cardiovascular protective mechanisms. For the sake of resolving this question, we designed and synthesized a clickable activity-based probe (CE-P), which could be utilized to fish the functional targets in HUVECs using a gel-based strategy.

中文翻译：

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目标捕捞和鉴定金盏花甙E为Hsp90AB1：基于可点击活性的探针的设计，合成和评估。

在我们先前的报道中，金盏花甙E（CE）是一种从Aralia elata中分离的天然三萜类化合物，可以预防ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤。但是，CE的确切目标和机制仍然难以捉摸。为了解决这个问题，我们设计并合成了可点击的基于活动的探针（CE-P），可使用基于凝胶的策略将其用于HUVEC中的功能靶标。在先前对结构-活性关系（SAR）的研究的基础上，我们在CE的C-28羧基处引入了炔基部分，从而保留了保护和抗凋亡活性。通过蛋白质组学方法，与CE-P结合的潜在蛋白质之一被鉴定为Hsp90AB1，并通过纯重组Hsp90AB1和竞争性测定法进行了进一步验证。这些结果证明CE可以结合Hsp90AB1。我们还发现，ox-LDL处理后，CE可以逆转Hsp90AB1的下降。为了使我们的结果更有说服力，我们进行了SPR分析，亲和动力学分析表明CE / CE-P可以剂量依赖性方式结合Hsp90AB1。综上所述，我们的研究表明CE可能与Hsp90AB1结合以保护细胞损伤，这可能为进一步探索其心血管保护机制提供基础。为了解决这个问题，我们设计并合成了可点击的基于活动的探针（CE-P），可使用基于凝胶的策略将其用于HUVEC中的功能靶标。为了使我们的结果更有说服力，我们进行了SPR分析，亲和动力学分析表明CE / CE-P可以剂量依赖性方式结合Hsp90AB1。综上所述，我们的研究表明CE可能与Hsp90AB1结合以保护细胞损伤，这可能为进一步探索其心血管保护机制提供基础。为了解决这个问题，我们设计并合成了可点击的基于活动的探针（CE-P），可使用基于凝胶的策略将其用于HUVEC中的功能靶标。为了使我们的结果更有说服力，我们进行了SPR分析，亲和动力学分析表明CE / CE-P可以剂量依赖性方式结合Hsp90AB1。综上所述，我们的研究表明CE可能与Hsp90AB1结合以保护细胞损伤，这可能为进一步探索其心血管保护机制提供基础。为了解决这个问题，我们设计并合成了可点击的基于活动的探针（CE-P），可使用基于凝胶的策略将其用于HUVEC中的功能靶标。这可能为进一步探索其心血管保护机制提供基础。为了解决这个问题，我们设计并合成了可点击的基于活动的探针（CE-P），可使用基于凝胶的策略将其用于HUVEC中的功能靶标。这可能为进一步探索其心血管保护机制提供基础。为了解决这个问题，我们设计并合成了可点击的基于活动的探针（CE-P），可使用基于凝胶的策略将其用于HUVEC中的功能靶标。