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黑曲霉中胍丁胺分解代谢的新途径:4-胍基丁酸酪氨酸酶测定。
Methods in Molecular Biology Pub Date : 2017-10-29 , DOI: 10.1007/978-1-4939-7398-9_17
Tejaswani Saragadam 1 , Narayan S Punekar 1
Affiliation  

4-胍基丁酸酶(GBase)催化4-胍基丁酸(GB)水解为4-氨基丁酸(GABA)和尿素。在这里,我们描述了从公开文献中适当修改的估算尿素和GABA的方法。使用改良的阿奇博尔德法通过比色测定法测定尿素​​。但是,这种方法的低灵敏度通常使其无法进行精细的动力学分析。为克服此限制,开发了一种高灵敏度的检测GABA的方法,该方法甚至可以检测化验混合物中的1μMGABA。在对GABA进行HPLC分析之前,先通过高氯酸(PCA)和氢氧化钾对样品进行脱蛋白处理。该方法涉及与邻苯二甲醛(OPA)结合巯基3-巯基丙酸(MPA)进行预柱衍生。然后在反相高效液相色谱(RP-HPLC)下使用等度洗脱检测荧光GABA衍生物。这里描述的协议可广泛应用于涉及尿素和GABA作为代谢产物的其他生物样品。



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更新日期:2019-11-01
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