二次谐波产生（SHG）成像可用于可视化独特的生物学现象，但由于它们与SHG一起产生的强荧光信号，因此目前可用的染料限制了其应用。在这里，我们报告第一个非荧光和膜电势敏感SHG活性有机染料Ap3。与以前使用的荧光染料FM4-64形成鲜明对比的是，Ap3具有光稳定性，并在质膜上生成SH信号，而几乎没有荧光信号。当在神经元中进行测试时，Ap3-SHG显示出线性的膜电位敏感性和对动作电位的快速响应，并且与FM4-64相比，其光损伤也显着降低。Ap3具有SHG特异性，因此可以同时对来自各种报告分子的SHG信号和荧光信号进行完全独立的成像，包括细胞器和细胞内钙的标志物。因此，这种SHG特异性染料可以在生物样品中实现真正的多峰双光子成像。



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