3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）是生物分析中常用的显色底物，多通过过氧化物酶的催化氧化用于酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫组化及葡萄糖检测等。过氧化物酶底物除TMB以外，还包括其他联苯胺底物，在早期用于血液检测及ELISA，然而自21世纪后，TMB几乎逐渐取代了其他联苯胺类显色底物，如今TMB显色甚至成为衡量纳米酶活性的标准。研究人员的这种选择，是基于何种考量，目前并不完全清楚。

基于此，我们系统地研究了联苯胺底物化学性质与显色反应分析性能之间的关系，阐述了TMB在生物分析中作为“Chosen substrate”的合理性。结果表明，相比于现已存在的二取代底物及合成的四取代底物，TMB的单/双电子产物吸收峰重叠程度最小，且具有最纯的显色产物及最高的稳定性，适合裸眼定性分析，检测灵敏度高。同时，我们发现烷基取代的底物整体显色效果最佳，这一规律也为设计理想的显色底物提供了一定的指导意义。

相关成果以“Rationale of 3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine (TMB) as the Chromogenic Substrate in Colorimetric Analysis”为题发表在Analytical Chemistry上。本研究得到国家自然科学基金（21874093）与四川省科技计划（20CXTD0096）的资助。