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细菌免疫荧光染色的一种改良方法,可消除抗体从固定核中的排斥。
Biochemistry ( IF 2.9 ) Pub Date : 2019-11-04 , DOI: 10.1021/acs.biochem.9b00724
Seongjin Park , Matthew A Reyer , Eric L McLean , Wei Liu , Jingyi Fei

免疫荧光(IF)被广泛用于研究蛋白质的细胞定位和组织。但是,诸如固定和通透性之类的步骤可能会影响细胞形态和/或引入伪影。对于细菌细胞,IF常用的通透方法包括溶菌酶处理。在这里,由于特定的通透性方法,我们证明了IF的两个潜在陷阱:溶菌酶处理引起的细胞变平或破裂以及抗体无法进入固定的核苷酸区域。为解决这些问题,我们提出了一种改进的细菌细胞中频方法,该方法包括用70%乙醇,溶菌酶和DNase I联合处理。在溶菌酶透化之前用70%乙醇处理可以更好地保留细菌的三维形状。细胞,溶菌酶透化后再用DNase I进行处理,可以消除抗体无法进入核苷酸区域。我们进一步证明了DNase I处理不会影响DNA相关结构或蛋白质组织的保存。最后,该方法还与需要将IF与RNA荧光结合的应用兼容原位杂交。



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更新日期:2019-11-04
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