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HLTF 破坏 Cas9-DNA 切割后复合物以允许 DNA 断裂处理
Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2024-07-10 , DOI: 10.1038/s41467-024-50080-y Giordano Reginato 1 , Maria Rosaria Dello Stritto 1 , Yanbo Wang 2, 3 , Jingzhou Hao 4, 5 , Raphael Pavani 6 , Michael Schmitz 7 , Swagata Halder 1, 8 , Vincent Morin 9 , Elda Cannavo 1 , Ilaria Ceppi 1 , Stefan Braunshier 1 , Ananya Acharya 1 , Virginie Ropars 9 , Jean-Baptiste Charbonnier 9 , Martin Jinek 7 , Andrè Nussenzweig 6 , Taekjip Ha 2, 4, 5, 10, 11 , Petr Cejka 1
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CRISPR-Cas 介导的基因组修饰的结果取决于 DNA 双链断裂 (DSB) 处理和修复途径的选择。蛋白质阻断的 DSB 的同源定向修复 (HDR) 需要由 MRE11 复合物的核酸内切酶活性启动 DNA 末端切除。使用重构反应,我们发现 Cas9 断裂意外地不能被 MRE11 复合体直接切除。相比之下,Cas12a 催化的断裂很容易被处理。与 Cas12a 不同,Cas9 会桥接断端,从而阻止 MRE11 检测和处理 DSB。我们证明 Cas9 必须在 DNA 切割后脱位,以允许 DNA 末端切除和修复。使用单分子和批量生化检测,我们接下来发现 HLTF 转位酶直接从断裂末端去除 Cas9,这允许通过 DNA 末端切除或非同源末端连接机制进行 DSB 处理。从机制上讲,HLTF 的活性需要其 HIRAN 结构域和 Cas9 RuvC 结构域切割非目标 DNA 链产生的 3' 末端的释放。因此,HLTF 去除 H840A,但不去除 D10A Cas9 切口酶。 HLTF 去除 Cas9 H840A 解释了人类细胞中两种 Cas9 切口酶变体的不同细胞影响,对基因编辑具有潜在影响。
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