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用于塑料生物升级应用的聚羟基脂肪酸酯 (PHA) 生产细菌底盘中遗传部分的无缝和正交表达
MethodsX Pub Date : 2023-10-11 , DOI: 10.1016/j.mex.2023.102434 Matthlessa Matthew Minggu 1 , Nur Anisza Hanoum Naseron 1 , Hazlam Shamin Ahmad Shaberi 1 , Nor Azlan Nor Muhammad 1 , Syarul Nataqain Baharum 1 , Ahmad Bazli Ramzi 1
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更新日期：2023-10-14
MethodsX Pub Date : 2023-10-11 , DOI: 10.1016/j.mex.2023.102434 Matthlessa Matthew Minggu 1 , Nur Anisza Hanoum Naseron 1 , Hazlam Shamin Ahmad Shaberi 1 , Nor Azlan Nor Muhammad 1 , Syarul Nataqain Baharum 1 , Ahmad Bazli Ramzi 1
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产生聚羟基脂肪酸酯 (PHA) 的细菌代表了用于废物生物转化和生物升级回收的强大合成生物学基础，其中 PHA 可以作为最终产品生产。在这项研究中，我们提出了一种无缝质粒构建方法，用于在 PHA 生产模型细菌恶臭假单胞菌和新梭菌中正交表达重组 PET 水解酶 (PETase) 。为此，本研究描述了利用 SureVector (SV) 系统在生物工程恶臭假单胞菌 (P. putida) 和 C. necator 中生成 pSV-Ortho-PHA (pSVOP) 表达平台的无缝克隆和表达方法。遗传部分，特别是 Trc 启动子、pBBR1 复制起点、锚定蛋白和信号序列，用于在电感受态细胞中转化基于 pSVOP 的质粒，并在恶臭假单胞菌和线虫中正交表达PETase。还描述了确认相应 PETase 表达菌株中 PETase 活性功能表达的验证步骤，以证明建立生物工程恶臭假单胞菌和 C. necator作为专为塑料生物升级改造而设计的全细胞生物催化剂的无缝且详细的方法。
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用于在 PHA 生产细菌中正交表达的无缝质粒构建。
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高效生成恶臭假单胞菌和新梭菌电转化体的分步指南。
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用于全细胞生物催化的快速菌株开发（设计、构建、测试和学习）的适应性方法。
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