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各种固定化蘑菇酪氨酸酶的催化​​特性:仿生电流生物传感器未来发展的动力学研究
Journal of Electroanalytical Chemistry ( IF 4.1 ) Pub Date : 2020-05-01 , DOI: 10.1016/j.jelechem.2020.114066
Milan Sýs , Michaela Obluková , Viliam Kolivoška , Romana Sokolová , Lucie Korecká , Tomáš Mikysek

摘要 蘑菇酪氨酸酶通过直接嵌入电极材料(改性碳糊电极)、将交联酶聚集体掺入聚合物膜(由 Nafion® 薄层覆盖的玻璃碳电极)和使用自组装单层共价连接来固定。 (带有化学结合酶的金电极)。批量配置中的标准 UV-Vis 分光光度法和电流分析法都作为研究酪氨酸酶动力学的补充方法,其儿茶酚酶活性导致电活性产物(邻醌)。由于电流检测的灵敏度更高,在酶消耗方面获得了明显的优势。制备的电流型酪氨酸酶生物传感器使用循环伏安法和原子力显微镜进行表征。比较了固定的和未结合的酪氨酸酶(游离酶溶液)对多巴胺和儿茶酚的 Michaelis 常数值。固定化酪氨酸酶的表观 Michaelis 常数值显着低于未结合酶的 0.840 mmol L-1 多巴胺的声明值。由于 0.061 mmol L-1 多巴胺的低表观米氏常数和 0.458 μA s-1 的高最大反应速度,排列在自组装单层中的酶酪氨酸酶可用作有效的传感器。这一事实反映了酶分子的理想排列,导致结合位点的高可用性。Tris-甘氨酸十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和原子力显微镜表明,分子量为25 kDa的蛋白质优选结合在化学修饰的金电极上。



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更新日期:2020-05-01
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