为了可视化白色念珠菌中的蛋白质-蛋白质相互作用与双分子荧光互补（BiFC）方法，我们创建了一个带有质粒pWTN1和pWTN2的Tet-on系统。这两个质粒均带有潮霉素B抗性标记（CaHygB），该标记与原始的Tet-on质粒pNIM1兼容，后者携带了神经丝菌素抗性标记（CaSAT1）。通过使用GFPmut2和mCherry作为报告基因，我们发现两个互补的Tet-on质粒在白色念珠菌中与多西环素具有剂量依赖性协同作用，并且融合蛋白CaCdc11-GFPmut2和mCherry-CaCdc10的表达该系统是针对隔膜的。此外，为了检测与分裂的荧光蛋白的重组相关的蛋白-蛋白相互作用，我们将mCherry纳入了我们的系统。我们生成了pWTN1-RN和pNIM1-RC，它们分别表达mCherry的N末端（氨基酸1-159）和C末端（氨基酸160-237）。为了用mCherry验证BiFC，我们创建了pWTN1-CDC42-RN（或pWTN1-RN-CDC42）和pNIM1-RC-RDI1质粒。含有这些用强力霉素处理的质粒的白色念珠菌细胞共表达mCherry的N端和C端片段，分别与CaCdc42和CaRdi1融合在N端或C端，并且CaCdc42-CaRdi1相互作用重建了一种功能形式mCherry。在白色念珠菌中基于Tet-on的BiFC系统的建立应有助于在各种条件下探索蛋白质之间的相互作用。我们创建了pWTN1-CDC42-RN（或pWTN1-RN-CDC42）和pNIM1-RC-RDI1质粒。含有这些用强力霉素处理的质粒的白色念珠菌细胞共表达mCherry的N端和C端片段，分别与CaCdc42和CaRdi1融合在N端或C端，并且CaCdc42-CaRdi1相互作用重建了一种功能形式mCherry。在白色念珠菌中基于Tet-on的BiFC系统的建立应有助于在各种条件下探索蛋白质之间的相互作用。我们创建了pWTN1-CDC42-RN（或pWTN1-RN-CDC42）和pNIM1-RC-RDI1质粒。含有这些用强力霉素处理的质粒的白色念珠菌细胞共表达mCherry的N端和C端片段，分别与CaCdc42和CaRdi1融合在N端或C端，并且CaCdc42-CaRdi1相互作用重建了一种功能形式mCherry。在白色念珠菌中基于Tet-on的BiFC系统的建立应有助于在各种条件下探索蛋白质之间的相互作用。CaCdc42-CaRdi1相互作用重建了mCherry的功能形式。在白色念珠菌中基于Tet-on的BiFC系统的建立应有助于在各种条件下探索蛋白质之间的相互作用。CaCdc42-CaRdi1相互作用重建了mCherry的功能形式。在白色念珠菌中基于Tet-on的BiFC系统的建立应有助于在各种条件下探索蛋白质之间的相互作用。



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